Yeni koronavirüs nükleik asit tespiti

Nükleik asit tespiti erken teşhis, yüksek hassasiyet ve özgüllük özelliklerine sahiptir ve yeni koroner pnömoni teşhisi için "altın standart"tır.Şu anda en yaygın olarak kullanılan gerçek zamanlı floresan kantitatif RT-PCR teknolojisi.Genellikle virüsün ORF1ab ve N genlerinde yer alan iki hedef tespit edilir.SARS-CoV-2 virüsü nükleik asidinin pozitif olduğunu doğrulamak için aynı numune çift hedef pozitif veya tekrarlanan testi tek hedef pozitif olarak karşılamalıdır veya iki numune aynı anda tek hedefi karşılamalıdır.

1. Nükleik asit tespit kitinin prensibi?Tespit hedefi olarak virüsün benzersiz gen dizisi kullanılır.PCR amplifikasyonu sayesinde, seçtiğimiz hedef DNA dizisi katlanarak artar.Amplifiye edilmiş her DNA dizisi, önceden eklediğimiz floresan etiketli bir prob ile birleştirilebilir., Floresan sinyali üretin, hedef genler ne kadar çok amplifiye olursa, biriken floresan sinyali o kadar güçlü olur.Virüs içermeyen örneklerde hedef gen amplifikasyonu olmadığı için floresans sinyalinde artış saptanamaz.Bu nedenle nükleik asit tespiti aslında floresan sinyallerinin birikimini tespit ederek numunede viral nükleik asit olup olmadığını belirlemektir.

2. Nükleik asit testi örneklerinin türleri nelerdir?

Genellikle nazal swablar, boğaz swabları, nazofaringeal swablar, balgam, bronşiyal lavaj sıvısı, alveolar lavaj sıvısı vb.

3. Beş aşamalı tespit Yeni koronavirüs tespit prosedürü beş adım gerektirir: numune alma, numune tutma, saklama, nükleik asit ekstraksiyonu ve bilgisayar testi.Bu, tamamlanması için titiz bilimsel deneyler gerektirir.

1. Faringeal swabın ve bilateral faringeal tonsillerin arka duvarını faringeal swabla 5-10 kez silin ve swabı döndürmeye devam edin;

2. Tıbbi personelin numuneyi tutması gerekir ve swab kafası hücre koruma solüsyonuna daldırılır ve kuyruk kırılır.Tüp kapağını hemen sıkın;

3. Numune tüpünü saklayın, kapalı bir torbaya koyun ve zamanında inceleme için gönderin; inceleme işlemi, 2-8 santigrat derecede saklanan sıkı bir nakliye ortamı gerektirir.

4. Nükleik asit ekstraksiyonunu çalıştırın, sonraki tespit için inaktive edilmiş virüs örneğinden nükleik asidi çıkarın ve bir nükleik asit ekstraktörü gibi otomatik ekipman kullanın.

5. Floresan PCR nükleik asit tespiti, yani makine tespiti, özütün floresan PCR amplifikasyon reaksiyonuna girmesi 70-80 dakika sürer.

4. Nükleik asit tespiti ile ilgili sorunlar nelerdir?

Yanlış örnekleme, yanlış örnek saklama, farklı tipte örneklerin kullanımı ve farklı üreticilere ait reaktiflerin kullanımı nedeniyle yanlış negatif, nükleik asit testi sonuçlarının "yanlış negatif" olmasına ve tanının atlanmasına neden olabilir;

Tespit ekipmanı veya platformları için yüksek gereksinimler, yüksek hassasiyetli RT-PCR cihazları pahalıdır ve yüksek laboratuvar temizliği ve operatörler gerektirir;

Nükleik asit testi uzun zaman alır ve bir RT-PCR testinin tamamlanması genellikle 4-6 saat sürer.Ancak, numune nakliyesi dikkate alındığında, numunelerin büyük bir birikimi olması durumunda, sonuçlar genellikle en kısa sürede 24 saat içinde rapor edilebilir.Bu nedenle, nükleik asit testi negatif olduğunda, IgM ve IgG antikor tespitinin eklenmesi, nükleik asit testinin eksik tanıya neden olması muhtemel olan eksiklikleri telafi edebilir.